1.制止压力和温度的急剧变革及任何机器震惊。温度的忽然变革大概使色谱柱从高处失下都市影响柱内的添补情况；柱压的忽然降低或低落也会激动柱内填料，因而，在调治流速时应该迟缓举行，在阀进样时阀的转动不克不及过缓。

 

2.应渐渐改动溶剂的构成，分外是反相色谱中，不该间接从无机溶剂改动为所有是水，反之亦然。

 

3.一样平常说来色谱柱不克不及反冲，只要消费者指明该柱可以反冲时，才可以反冲撤除留在柱头的杂质。不然反冲会敏捷低落柱效。

 

4.选择利用相宜的活动相(尤其是pH)，以制止牢固相被毁坏。偶然可以在进样器后面毗连一预柱，剖析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使活动相在进入剖析柱之前事后被硅胶“饱和”，制止剖析柱中的硅胶基质被消融。

 

5.常常用强溶剂冲洗色谱柱，扫除保存在柱内的杂质。在举行洗濯时，对流路体系中活动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种活动相的体积应是柱体积的20倍左右。

 

上面枚举一些色谱柱的洗濯溶剂及次序，作为参考：

硅胶柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇顺次冲洗，然后再以相反次序顺次冲洗，一切溶剂都必需严厉脱水。

甲醇能洗去十大信誉平台的强极性杂质，已烷使硅胶外表重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)顺次冲洗，再以相反次序顺次冲洗。假如下一步剖析用的活动相不含缓冲液，那么可以省略最初用水冲洗这一步。

四氢呋喃与乙腈或甲醇的混淆溶液能撤除类脂。偶然也注射二甲亚砜数次。别的，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱能撤除卵白质净化。

阳离子互换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子互换柱可用稀碱缓冲液冲洗，撤除互换功能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷(撤除吸附在牢固相外表的无机物)、甲醇、水顺次冲洗。

 

6.保管色谱柱时应将柱内充溢乙腈或甲醇，柱讨论要拧紧，避免溶剂挥发枯燥。相对克制将缓冲溶液留在柱内静置留宿或更永劫间。

 

7.色谱柱利用历程中，假如压力降低，一种大概是烧结滤片被梗塞，这时应改换滤片或将其取出举行洗濯；另一种大概是大分子进入柱内，使柱头被净化；假如柱效低落或色谱峰变形，则大概柱头呈现塌陷，去世体积增大。在后两种状况产生时，警惕拧开柱讨论，用干净小钢将柱头填料取出1～2mm高度(留意把被净化填料取净)再把柱内填料整平。然后用得当溶剂潮湿的牢固相(与柱内相反)填满色谱柱，压平，再拧紧柱讨论。如许处置后柱效能失掉改进，但很难规复到新柱的程度。柱子生效通常是柱端局部，在剖析柱前装一根与剖析柱相反牢固相的短柱(5～30mm)，可以起到掩护、延伸柱寿命的作用。接纳掩护柱会丧失肯定的柱效，这是值得的。通常色谱柱寿命在准确利用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH=2～9范畴内利用。柱子利用一段工夫后，大概有一些吸附作用强的物质保存于柱顶，分外是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。

 

8.新的色谱柱在利用一段工夫后柱顶填料大概塌陷，使柱效降落，这时也可补加填料使柱效规复。每次事情完后，最好用洗脱才能强的洗脱液冲洗，比方，ODS柱宜用甲醇冲洗至基线均衡。当接纳盐缓冲溶液作活动相时，利用完后使用无盐活动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物大概会腐化不锈钢管道，不宜临时与之打仗。装在HPLC仪上柱子如不常常利用，应每隔4～5天开机冲洗15分钟。